经研究证实，在血清中所能够检测到的HBV RNA主要为3.5kb长的pgRNA，目前并未有大量研究揭示不同靶点区域的HBV RNA是否在检出率或是临床使用中存在差异。南方医科大学南方医院发表在Antiviral Research上的一篇研究显示，在停药队列中，S区HBV RNA的检出率最高；在ETV治疗队列中，不同区段的RNA区别并不显著，而在预测停药后的临床复发当中，不同区段的RNA并无太大差别，但都优于HBV DNA。

(资料图片)

方法：该研究回顾性分析了三组没有接受或停止NAs治疗的非肝硬化CHB患者。

ETV队列

纳入 78名初治、HBeAg阳性、接受恩替卡韦（ETV）单药治疗的CHB患者，并且从2015年5月到2018年9月在南方医院肝病科完成了为期2年的治疗随访，收集基线和第6个月的血清样本，检测血清 HBV RNA 水平。

STOP队列1

纳入127名患者，来自一系列持续 7 年的试验，其中包括 2 年的随机试验对照试验（EFFORT 1研究），延长3年试验（EFFORT 2研究）及其2年进一步延长试验（EFFORT3）。入组患者一共包括599例初治HBeAg阳性CHB患者接受替比夫定的抗病毒治疗长达 7 年。从第三年开始，130名患者符合停止标准，定义为达到HBeAg血清转换和HBV DNA<300拷贝/毫升，持续至少48周，建议他们停止治疗并监测复发情况。

STOP队列2

STOP 队列 1 的主要限制是使用非一线药物（替比夫定）。因此，该研究对STOP队列2进行了单独的验证分析，招募了61名来自另一项前瞻性试验、并且使用恩替卡韦或替诺福韦停药的患者。

对以上三个队列患者的血清HBV RNA检测使用双靶点（靶向HBV RNA的5"和3"端，[DT-RNA]）和三个单靶点（靶向HBV RNA [PolyA-RNA]的S区[S-RNA]，X-区[X-RNA]和polyA尾部）（图1），以预测治疗结果。

图1：用于HBV RNA定量检测的双靶标和单靶标检测的扩增子位置

注释：全长 pgRNA 和 3′末端截短的 pgRNA 显示为实线或虚线曲线。红色粗体曲线代表血清HBV RNA的扩增子检测。

结果显示，在两个STOP队列中，S-RNA的阳性率最高（队列1为68.5%，队列2为60.7%），而PolyA-RNA的含量最低一个（队列 1 和队列 2 分别为 11.0% 和 8.2%，图 2）。但是在ETV治疗队列当中，未治疗和已治疗 6 个月的患者群体中，DT-RNA、S-RNA 和 X-RNA 的区别并不显著（平均数分别为6.1、6.0和5.7 log10 copies/ml, p > 0.05）。

图2：不同检测方法定量血清HBV RNA水平以及ETV和STOP队列中的血清HBV DNA水平

注释：来自ETV和两个STOP队列的CHB患者的DT-RNA，S-RNA，X-RNA，PolyA-RNA和HBV DNA的阳性率。“Untreated”和“Treated（6 month）”代表血清HBV RNA/DNA水平在ETV队列中，未治疗和接受治疗的患者在基线和6个月时的阳性率。

研究进一步显示，就预测临床复发率而言，DT-RNA、S-RNA和X-RNA在不同时间点的AUC值较为类似，但都优于HBV DNA（图3）。

图3：HBV RNA预测治疗结束后的临床复发比例

注释：AUC用于STOP队列1的临床复发（A）以及STOP队列2的临床复发（B）。缩写：AUC，曲线下面积。*标记物和DT-RNA之间的差异是有统计学意义（P < 0.05）。

在STOP队列1种，DT-RNA的AUC，用于预测临床复发第1年、第2年、第3年和第4年分别为0.749、0.772、0.772和0.772，与 S-RNA 相似（0.729、0.751、0.751 和 0.751分别为第 1 年、第 2 年、第 3 年和第 4 年）和 X-RNA（0.724、0.753、0.753 和 0.753分别为第 1、2、3 和 4 年），但明显高于所有时间点的HBV DNA的预测值。而STOP队列2当中也是类似的情况。

若继续研究不同种类的RNA与累计复发率的关系，数据显示，高水平的HBV RNA的患者在4年累积复发率也会更高（图4）。

图4：STOP队列1治疗结束时不同HBV RNA状态的患者的累积临床复发率

在STOP队列-1中，在停药时HBV RNA阴性的患者，在随访第 4 年的临床复发率显著低于HBV RNA 呈阳性（DT-RNA，12.0% vs 49.9%；S-RNA，12.9% vs. 40.1%；X-RNA，14.6% vs 41.4%；PolyA-RNA，26.3% vs 75.4%，所有的 P值均小于 0.05。

小结：

在停药队列中，S区HBV RNA的检出率最高；在ETV治疗队列中，不同区段的RNA区别并不显著，而在预测停药后的临床复发当中，不同区段的RNA并无太大差别，但都优于HBV DNA。高水平的HBV RNA水平伴随较高的停药后累积复发率。

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